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Sh Ble基因筛选抗生素-博莱霉素(Zeocin)和腐草霉素(Phleomycin)区别(MKBio)

发布时间:2019-06-10 阅读:331

Sh Ble基因筛选抗生素:博莱霉素(Zeocin)和腐草霉素(Phleomycin

 

博莱霉素(Bleomycins,BLMs)是由轮枝链霉菌(Streptomyces verticillus)代谢产生的一种抗肿瘤糖肽抗生素大家族,该家族的成员目前使用比较多的是博莱霉素(Bleomycin)家族和腐草霉素(Phleomycin)家族,前者主要用做抗肿瘤化合物,与其他的抗癌剂联合使用,用于治疗淋巴瘤、鳞状细胞癌和睾丸癌等。后者主要用作分子遗传学研究中的一种选择性抗生素,用来筛选携带抗性基因Sh ble等的稳定转染细胞。

 

我司(懋康生物)在销售博莱霉素BLMs家族抗生素的过程中常遇到用户询问几种热卖产品的区别,现做出以下解释,供交流学习用。

 

对于腐草霉素(Phleomycin)(MS0008-1ML), 是一种糖肽类抗生素,结构上类似于抗生素Bleomycin (BLM)。纯化的腐草霉素主要由腐草霉素D1(Phleomycin D1)(末端胺基是胍丁胺)以铜离子螯合和盐酸盐形式提供。腐草霉素阻断细胞周期进入S期,虽然腐草霉素类似于Bleomycin,能破坏DNA,但不用作一种抗肿瘤剂。目前腐草霉素的作用机理并未完全得以阐明,据报道由于修饰的二噻唑部分,其不能插入DNA。RAD6 DNA修复基因在突变酵母内对腐草霉素抗性是必须的。

分子遗传实验中腐草霉素用作一种选择性抗生素,其具广谱的毒性,对细菌、真核微生物和植物和动物细胞呈体内活性。腐草霉素因此能用于鉴定和筛选含腐草霉素抗性基因比如Sh ble基因的各种细胞。


对于Zeocin™(MS0009-125MG)是博莱霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)抗生素家族的成员之一,从轮枝链霉菌Streptomyces verticillus中分离得到,对细菌、真菌(包括酵母菌)、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。Zeocin™是腐草霉素D1的商业名称,一种碱性、水溶性、铜离子螯合的糖肽抗生素。铜离子的存在使得溶液为蓝色,此铜螯合的形式为无活性。一旦进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin™被活化,嵌入DNA使其断裂,zui终导致细胞死亡。


腐草霉素(Phleomycin)与Zeocin™有效成分基本差不多,这也是这两种化合物的CAS号是一致的。但也有些许差异,腐草霉素(Phleomycin)建议用于对Zeocin™敏感性比较差的细胞,比如:丝状真菌和某些酵母菌。


腐草霉素(Phleomycin)与Zeocin™的基本特性(见下表格):更多信息请见maokangbio整理内容。

基本特性

腐草霉素(Phleomycin

博莱霉素(Zeocin™

编号

MS0008-1ML20MG/5ML

MS0009-125MG/1G

报价

598/2768

420/2850

CAS NO.

11006-33-0

11006-33-0

外观

蓝色溶液(20mg/ml

蓝色溶液(100mg/ml

筛选浓度

大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L

酵母菌筛选:50-300μg/mLYPD或基本培养基)

哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)

大肠杆菌:5µg/ml腐草霉素的低盐LB固体培养基;

酵母菌:10µg/ml腐草霉素的YEPD培养基;

真菌:10-50µg/ml腐草霉素的再生培养基,取决于宿主菌敏感性。

植物细胞:5-25µg/ml腐草霉素,取决于植物类型;

动物细胞:5-50 µg/ml腐草霉素,初次实验使用杀灭曲线来筛选zui佳工作浓度;


Sh ble基因赋予抗性的原理:来自Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因编码一种13,665Da大小的蛋白,该产物以化学计量方式结合Zeocin或phleomycin,抑制其DNA双链切割活性。因此,能表达此蛋白的宿主细胞被赋予Zeocin或phleomycin抗性。


—     —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


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