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MF2328 Stable化学感受态细胞
产品名称:MF2328 Stable化学感受态细胞
产品型号:MF2328
品牌:MKbio
产品数量:
产品单价: 280.00
日期:2019-09-26
MF2328 Stable化学感受态细胞的详细资料

Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品标签:

Stbl3;Stbl2;HB101;Stable;Direct repeats 直接重复片段;Lentiviral expression vectors 慢病毒表达载体;Gibson Assembly 一步法克隆检测试剂盒;

 

产品订购: 更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询,: 。:www.maokangbio。。com。

货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2328-1000UL

Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

280

MF2328-5000UL

Stable Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

50×100μl

1280

【好消息】:见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡,发表使用评论,赢红包,双重惊喜,行动起来啦。

 

产品组分:

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2328-1000UL

MF2328-5000UL

MF2328-A

Stable Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2328-B

Control Vector puC19, 10 pg/µl

10μl

10μl

 

菌株描述

Stable菌株是NEB公司开发的高转化效率的大肠杆菌菌株,特别适合分离含重复元件和不稳定插入序列的质粒克隆,也适合分离和扩繁逆转录病毒/慢病毒载体克隆。与商业化的同源重组反应体系比如NEBuilder HiFi DNA Assembly,Gibson Assembly反应体系和酶切连接体系都兼容。Stable菌株基因型与Stbl2,Stbl3没有关联性,但具有更优异的性能(见图1)。基因组含有重组酶recA1 relA1突变,能有效抑制长末端重复序列的重组,降低了错误重组的频率。还含有核酸酶内切酶endA1突变,避免了质粒提取过程中核酸酶的污染,显著提高制备质粒的产量和质量。基因组含有lacZΔM15,适用于蓝白斑筛选。菌株本身含链霉素和四环素抗性,在成功转化后赋予其额外的筛选标志。

Stable菌株基因型:F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC

 

菌株亮点

◇   Stable菌株具有很高的转化效率,经pUC19检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA;

◇   Stable菌株是基因克隆进入腺病毒/慢病毒载体的推荐宿主菌;

◇   Stable菌株是克隆正向重复序列和反向重复序列的推荐宿主菌;

◇   Stable菌株含recA1突变,能减少克隆DNA的重组发生,从而降低错误重组频率;

◇   Stable菌株含mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),能有效转化真核来源的甲基化DNA或PCR、cDNA和许多其他来源的非甲基化DNA;

◇   Stable菌株含endA1(非特异核酸内切酶I)突变,确保得到zui高质量和产量的质粒;

◇   Stable菌株含fhuA突变,具有对噬菌体T1的抗性;

◇   Stable菌株含lacZΔM15,适用于具α-互补载体的蓝白斑筛选;

 

产品描述

本品是Stable菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

Stable与Stbl3克隆性能(错误重组率)的比较

 

图1. Stable与Stbl3克隆不稳定DNA序列的性能比较。pUC-5xREP含5 x 32bp 重复序列,其在普通大肠杆菌中很不稳定。酶切后线性化的pUC19片段2.2ng+1ng 5xREP DNA段配制成重组反应体系,重组反应完成后分别转化Stable感受态细胞(A)或Stbl3感受态细胞(B),复苏60min,涂布在含50μg/ml羧苄青霉素的LB平板,30℃培养20h。之后做菌落PCR,检测5xREP DNA插入的稳定性(含有正确插入片段的克隆,菌落PCR片段为623bp)。

 

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】【详见MKBIO内容】

附表1 固体和液体LB培养基配方

附表2 固体和液体SOC培养基配方

 

附录1. Stable感受态细胞常见问题【详见MKBio内容】

1.      Stable菌株的基因型和各基因赋予菌株的特征?

Stable基因型:F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14-  Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC

◇   蓝白斑筛选(Φ80 Δ(lacZ)M15):使得β-gal omega段。lacX74去除染色体上的β-gal基因。pUC19和相似基因编码β-半乳糖苷酶(lacZ)的α肽。α肽与β-半乳糖苷酶的omega段(由F'携带,α-互补)结合。当β-半乳糖苷酶按照这种方式重新组合后能正常表达并切割X-gal生成蓝斑。当克隆DNA进入质粒破坏α肽基因,使得菌落为白斑。

◇   重组缺陷(recA1):大肠杆菌(E. coli)本身具修复系统能重组同源序列。基因组克隆通常有复制区,recA介导的重新排列不确定,特别当同源序列长于50bp。recA功能缺失的菌株比recA+菌株通常更缓慢生长。

◇   内切酶I缺陷(endA1):野生型大肠杆菌的周质空间含非特异性内切酶。从这些菌株中制备质粒特别要注意质粒被降解。endA突变去除这个基因,显著改善了质粒制备物的质粒。

◇   限制缺陷(Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)):野生型大肠杆菌K12菌株含限制性内切酶,能切割含位点(AAC(N6)GTGC和GCAC(N6)GTT的DNA。虽然大肠杆菌DNA自身受保护,不被同源甲基转移酶所降解,但外源DNA会在这些位点被切割。限制缺陷删减了甲基转移酶和内切酶的基因。

◇   甲基限制缺陷(mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)):大肠杆菌具有一套酶系统,mcrA,mcrB和mrr能够切割在高等真核生物和某些植物、细菌菌株发现的甲基化DNA。来自PCR扩增片段,cDNA或原先在大肠杆菌内扩繁的DNA不会被甲基化,也不会被切割。

◇   T1噬菌体抗性(fhuA):T1,一种极端烈性噬菌体需要大肠杆菌羟肟酸铁吸收受体用来感染。这个基因的删减赋予对这个噬菌体的抗性,且不会显著影响转化或细胞的生长特征。

2.      Stable感受态细胞能替换Stbl2或Stbl3吗?

答复:是的

 

3.      Stable感受态细胞适合大质粒转化?

答复:是的

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

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Stable化学感受态细胞
Stable化学感受态细胞
Stable化学感受态细胞

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