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MF2488 HT115 DE3大肠杆菌化学感受态细胞
产品名称:MF2488 HT115 DE3大肠杆菌化学感受态细胞
产品型号:MF2488
品牌:
产品数量:
产品单价: 396.00
日期:2019-08-14
MF2488 HT115 DE3大肠杆菌化学感受态细胞的详细资料

HT115(DE3) Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞


产品标签:

HT115(DE3);RNAi feeding strain RNA干扰喂养菌株;线虫RNAi;Nematode Growth Medium (NGM) 线虫培养基;C. elegans 秀丽隐杆线虫;


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货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2488-1000UL

HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

396

MF2488-5000UL

HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

50×100μl

1696


菌株描述

HT115(DE3)菌株是一种RNAi饲养菌株,具四环素抗性,能在37℃,LB培养基上进行有氧生长。主要用于线虫的干扰实验。

HT115(DE3)菌株是一种特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株,此菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因,在IPTG的诱导下表达T7 RNA聚合酶,进而启动线虫dsRNA的表达),除了用于线虫RNAi干扰实验,也适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白表达。

HT115(DE3)菌株基因型:E. coli [F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5 promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAse III minus) ]

产品描述

本品是大肠杆菌HT115(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号

组分名

货号(规格)

MF2488-1000UL

MF2488-5000UL

MF2488-A

HT115(DE3) Chemically Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2488-B

Control Plasmid puC19, 10pg/μl

10μl

10μl


保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。


注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~10mM。

8) 为了进行干扰质粒中dsRNA的生成,HT115(DE3)菌株需在特殊的RNAi NGM(Nematode Growth Media)平板上培养,添加有IPTG和氨苄(50µg/ml)或羧苄(25µg/ml)抗生素,倾向于用羧苄应其更稳定。

9) 为了得到足量的蛋白,需就最加诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取50μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


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10g

MF2002-1G

IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

1g


附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最加诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养2~4h。为了确定目的蛋白的最加诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母液。



 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


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HT115 DE3大肠杆菌化学感受态细胞 
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