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MF2482 大肠杆菌化学感受态细胞
产品名称:MF2482 大肠杆菌化学感受态细胞
产品型号:MF2482
品牌:
产品数量:
产品单价: 396.00
日期:2019-08-14
MF2482 大肠杆菌化学感受态细胞的详细资料

OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞


产品标签:

OverExpress C43(DE3) pLysS;OverExpress C43(DE3);BL21 (DE3);OverExpress C41(DE3);表达感受态细胞;毒性蛋白表达;pET表达载体;


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产品名称

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价格(元)

MF2482-1000UL

OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞

10×100μl

396

MF2482-5000UL

OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

50×100μl

1696


菌株描述

OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大肠杆菌(E. Coli)菌株,有效表达不同物种有机生物体包括细菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳动物来源的毒性蛋白。

OverExpress菌株含赋予毒性蛋白抗性的遗传突变。C41(DE3)菌株来源于BL21(DE3),此菌株含一个突变,能降低T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的水平,从而预防许多重组毒性蛋白过表达引起的细胞死亡。C43(DE3)菌株来源于C41(DE3),通过筛选对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株而获得。C43(DE3)与C41(DE3)菌株相比,至少携带另一个不同突变,使其获得更广泛更高的毒性蛋白耐受能力。

正如BL21(DE3)菌株,OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都含DE3区,所有菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),适用于靶基因克隆进入T7启动子表达载体比如pET系列的蛋白生产。

OverExpress C41(DE3) pLysS和C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性,能够表达少量T7溶菌酶(一种天然的T7 RNA聚合酶抑制剂)。T7溶菌酶能作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,降低目的基因的背景表达水平,但不会干扰IPTG诱导的表达,从而能够稳定重组表达的蛋白,特别是毒性蛋白。氯霉素(34 µg/ml)需加入菌株培养基内以维持pLysS质粒。

OverExpress C43(DE3) pLysS菌株基因型:F– ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)

产品描述

本品是大肠杆菌OverExpress C43(DE3) pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

组分编号

组分名

货号(规格)

MF2482-1000UL

MF2482-5000UL

MF2482-A

OverExpress C43(DE3)pLysS Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2482-B

Control Plasmid puC19, 10pg/μl

10μl

10μl


注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输,感受态细胞应在-80℃保存。

2) 感受态细胞在冰上融化,不可在冰上放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

7) 诱导时,IPTG浓度范围可选:0.1~2mM。

8) 为了得到足量的蛋白,需就最加诱导时间、温度、IPTG浓度进行优化。

9) OverExpress C43(DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素外,其他所用固体培养基、液体培养基均应添加34µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。

10) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1) 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰浴静置25min。

2) 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3) 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4) 低速离心收菌(比如5000rpm,1min),留取50μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含34µg/ml氯霉素以及所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养过夜。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(5000 rpm,1min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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货号

名称

规格

MF2331-1000UL

BL21 (DE3) Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞

10×100μl

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10×100μl

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10×100μl

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10×100μl

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10×100μl

MS0021-10G

Chloramphenicol, USP Grade 氯霉素

10g

MS0018-10G

Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠

10g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐

5g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素

10g

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade 利福平

1g

MF2002-1G

IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷

1g


附录I 蛋白诱导步骤(仅作参考)

1)从新鲜涂布平板上挑取一单克隆,转移到含相应抗生素的5ml LB液体培养基内。需注意对于OverExpress pLysS菌株,除筛选抗生素之外还要加入氯霉素(34 µg/ml)。

2)37℃,200rpm摇菌培养过液。为了最小化诱导前目的蛋白的最小化表达,添加葡萄糖(终浓度为0.2% w/v)到生长培养基内。

3)将步骤2)中过夜培养的菌液吸取0.5ml接种到含相应抗生素的50ml LB液体培养基内(建议使用500ml三角瓶培养)。

4)37℃,150rpm摇菌培养直至OD600达到0.6~0.8(建议0.6,约2.5h)。

5)【可选】用移液枪吸取1ml培养物到干净的离心管内,置于冰上直至用于凝胶分析或保存在-20℃。这是非诱导的对照样本。

5)加入IPTG使其终浓度为1mM。目的蛋白的最加诱导时间可能在2~16h,依蛋白而异。

6)37℃,120rpm培养3~4h。为了确定目的蛋白的最加诱导时间,建议作一个时间周期优化实验,范围从2~16h。

7)将培养物冰浴10min。4℃,5,000 x g离心10min收集菌株。

8)吸掉上清,将沉淀保存在-20℃(也能保存在更低的温度)。

IPTG母液(1M)配制

称量2.38g IPTG(Mw: 238.30)溶于适量去离子水,充分溶解后,调整终体积到10ml,并过滤除菌,即得到1M ITPG母ye。

氯霉素母液(34mg/ml)配制

称量适量氯霉素溶于乙醇配制成34mg/ml储存液,-20℃保存。工作浓度为34µg/ml。



 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本,以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。


大肠杆菌化学感受态细胞 
大肠杆菌化学感受态细胞 
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